牛奶是日常中常用的食品，牛奶中有時也會有抗生素。如何檢出抗生素呢？方法如下：
1、微生物檢測法：
微生物檢測法是應用較廣泛的方法，其測定原理是根據抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作用,來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留，如紙片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用傳統的微生物檢測方法，缺點是：（1）時間長；（2）顯色狀態判斷通過肉眼辨別，易產生誤差，對微紅色者無法做出準確判斷；（3）操作復雜。優點是費用低，一般實驗室都能操作。其中， 紙片法和TTC法是牛奶中藥物殘留檢測的兩種常用的微生物檢測法。
1.1紙片法：
紙片法，即PD法（Paper Disc）。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法。這兩種方法主要用來檢測牛奶中的β－內酰胺類抗生素，其操作過程基本相同，而選用的菌種不同。枯草桿菌紙片法檢測的結果易出現假陽性，為了確定陽性物質是否為青霉素（或β－內酰胺類），對加熱后的乳樣用青霉素酶處理，以滅活乳樣中的青霉素。然后再行檢測，檢測限可達0.01 IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法不僅用于檢測奶樣中β－內酰胺類抗生素，并能暗示是否還存在其它抑菌物質，檢測限可達0.008 IU/mL以下。一般在4h內即可獲得結果。因此，在實踐中嗜熱脂肪桿菌紙片法比枯草桿菌紙片法應用更為廣泛。此外，神保勝彥（1991）對紙片法作了進一步研究和改進。改進后的紙片法不僅能夠確定抗生素的種類，而且提高了檢出率和準確性，氯霉素最低檢出量0.01mg/kg，土霉素0.05mg/kg，鏈霉素1mg/kg，紅霉素0.05mg/kg，青霉素0.0025mg/kg。
1.2 TTC法：
TTC法，即氯化三苯基四氮唑法（ tripheye tetrazolium chloride），是目前我國食品衛生標準中規定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法（GB5409—85）。該法簡便、快速，無需特殊設備，3～4h可見報告，很適合牧場、乳品廠及食品衛生檢測部門采用。檢測各種抗生素所用的TTC法試驗的靈敏度（最低檢出量）分別為：青霉素0.004 U/mL，鏈霉素0.5 U/mL，慶大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL。
目前趨向研究更為靈敏、準確、簡便、快速的微生物檢測方法。如美國和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺實驗法（CAST）。此外，美國近年來補充的一個新的實驗方法－快速抗生素篩選法（FAST）。 盡管這些快速微生物檢測法有時會產生一些假陽性，但在某種程度上是允許的；如產生這類情況，可進一步做確證實驗。
2、理化檢測法：
理化檢測方法是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或性質來測定其含量，如高效液相色譜法、氣相色譜法、質譜法、聯用技術等等，能進行定性、定量和藥物鑒定，敏感性較高，但有的檢測程序較復雜，有的檢測費用較高。在牛奶中抗生素殘留檢測方面，最常用的理化檢測方法是高效液相色譜和聯用技術。
2.1高效液相色譜
高效液相色譜（HPLC）是目前廣泛應用的一種理化檢測方法，它引入了氣相色譜理論，在技術上采用了高壓泵，高效固定相和高靈敏度檢測器，實現了分離速度快、效率高和操作自動化。幾乎所有的化合物包括高極性／離子型待測物和大分子物質，均可用HPLC進行測定。HPLC的分離機制與常規柱色譜相同，但填料更加精細（ф 5～10μm），需高壓泵推動，柱效高（105塔板／m），速度快，靈敏度與GC相近。與GC相比，HPLC流動相參與分離機制，其組成、比例和pH值等可靈活調節，如離子對色譜、膠束色譜、手性分離色譜等，使許多極難分離的待測物得以分析。反相HPLC發展最快，目前已成為大多數抗生素殘留的常規分析方法。主要原因是：（1）化學鍵合固定相（C18或C8）性質穩定，不淋失；（2）使用水、甲醇或乙腈等水溶性有機溶劑作流動相，不干擾紫外檢測，成本低；（3）樣品中極性雜質先流出，只需待測物出峰后即可重復進樣，分析速度快。
最常用的檢測方式為濃度型的紫外檢測器和熒光檢測器。紫外檢測器（UVD）最普及，其次是熒光檢測器和電化學檢測器（EChD）。由于奶樣中藥物殘留量少，背景干擾往往很嚴重，因此一般都通過柱前衍生反應來提高紫外檢測器檢測殘留的靈敏度。彭莉等報道了用高效液相色譜法（HPLC）檢測牛奶中氯霉素的殘留量，采用乙酸乙酯提取牛奶中殘留的氯霉素，用紫外檢測器在278nm檢測樣品。平均加收率94.8％，變異系數< 12.0％。此方法樣品前處理簡單、回收率高、實用性強、檢驗靈敏度高、重現性好、檢測數據準確可靠，可作為牛奶中氯霉素殘留檢測的確證方法。由于大部分抗生素在高于230nm的光譜區無吸收，而在低于230nm的紫外區許多樣本基質和流動相產生干擾，需衍生化后測定，限制了紫外檢測器的應用。但是，大部分抗生素是手性分子，因此旋光檢測器有很大發展潛力。旋光檢測有以下特點：（1）選擇性高，樣本僅需簡單提取即可；（2）靈敏度高，利用He－He激光作光源，靈敏度可達5～10uα水平；（3）可同時得到流出組分的比旋度[α]，用以定性。目前，該方法已用于紅霉素、慶大霉素、羧芐青霉素和吩羧青霉素殘留的測定。
此外，光二極管陣列檢測器（DAD）是近10年來HPLC最重要的突破。DAD可同時接收整個光譜區的信息，在色譜峰流出同時能進行每個瞬間的動態光譜掃描并快速采集信號，經計算機處理后得到色譜—光譜的三維圖譜，信息量大大增加。一次進樣可得到每個組分峰的定量、定性和純度信息，靈敏度亦明顯提高。
2.2聯用技術
各種分析技術聯用是現代獸藥殘留分析乃至整個分析化學方法上的發展特點。計算機的應用加速了這一趨勢。聯用技術可揚長避短，一般集分離、定量和定性（分子結構信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯用技術，有TLC－MS、GC－MS、LC－MS、CZE－MS、LC－NMR、SFC－MS等。TLC－MS是最簡單的離線聯用技術。GC－MS已相當成熟，應用相對較多。但這些聯用儀價格昂貴，遠不如HPLC或GC那樣普及。
MS無疑可作為HPLC的通用型檢測器。使用微型柱（15×0.3cm id）和適宜的接口技術，如熱噴霧（TSP）、微粒束（PB）等解決了LC與MS的連接問題；使用軟電離技術，如快原子轟擊（FAB）、場解吸（FD）等解決了難氣化物質的離子化問題。LC－MS現在已進入實用階段，其靈敏度較熒光檢測器高1個數量級，能方便地對ng級的獸藥殘留組分進行檢測與結構確證。LC－NMR還可提供待測物立體化學方面的信息。
LC/MS是除GC/MS之外的一種集高效分離和多組分定性、定量于一體的系統。LC/MS對高沸點、不揮發和熱不穩定的化合物分離和鑒定具有獨特的優勢。色/質聯用法由于實現了高效層析分離和檢測聯機，可用微電腦控制層析條件、程序和數據處理，其特異性、靈敏度和重復性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測。其分析方式有直接探頭分析法、直接液體導入法、GC/MS、LC/MS聯用法等。使用電子轟擊離子化、化學電離、快速原子轟擊、熱噴霧電離、等離子體噴霧、粒子束電離、大氣壓化學電離（APCI）和電噴霧電離（ESI）技術對不同MS離子源條件下青霉素類藥物分子碎片類型的特征已經作了大量的工作。另外離子阱質譜技術（MS/MS）也已用于鑒別青霉素類藥物。如Straub等使用LC/ES/MS測定了牛奶中的幾種青霉素殘留。青霉素，鄰氯青霉素與芐青霉素的最低測定限為3～5μg/kg。Kihak 等以NCI方式的LC/PB/MS技術成功地對牛奶中OTC、TC與CTC殘留進行確證，方法檢測限為0.02～0.05μg/mL。
2.3其它理化檢測方法：
牛奶中抗生素殘留檢測方法還有氣相色譜法（GC）、高效薄層色譜（HPTLC）、超臨界流體色譜（SFC）和毛細管區域電泳法（CZE）等。這些方法盡管在殘留檢測中不常用，但因其各自特有的性能，能彌補常用方法中不足之處。如GC有許多高靈敏、通用性或專一性強的檢測器供選用，如氫焰離子化檢測器（FID）、氯磷檢測器（NPD）等，檢測限可達μg/kg級；HPTLC的斑點原位掃描定量、定性和高效分離材料（Φ3～10μm）改變了常規TLC在靈敏度和重現性方面的不足，但保持了TLC的簡便、快速和樣品容量大的優點，可使用正相或反相板，分辨率幾乎與HPLC相當，在抗生素殘留的快速篩選性檢測方面應用廣泛；SFC可彌補GC和HPLC的不足，方便地連接各種靈敏的檢測器（MS，ECD等）；CZE是90年代以來研究最活躍的分析技術之一，兼有高壓電泳的高速、高分辨和HPLC靈活、高效的優點，柱效高達105塔板／m。 Nishi等（1989，1990）使用CZE和MEKC成功地分離了十幾個β－內酰胺類抗生素。CZE將在簡化樣本前處理、多殘留分析和分析自動化方面發揮重要作用。目前CZE的主要問題是樣品量太小，限制了檢測的靈敏度。CZE－MS可能是最好的解決辦法。
此外，隨著接口技術的顯著改進，質譜作為一種質量流速型檢測器，正廣泛應用于殘留分析的檢測中。電化學檢測器也已用于檢測鄰氯青霉素、頭孢菌素和青霉素。
3、免疫法：
目前藥物殘留免疫分析技術主要分為兩大類：一為相對獨立的分析方法，即免疫測定法（immunoassays，IAs），如RIA、ELISA、固相免疫傳感器（soindphase immunosensor ）等；二是將免疫分析技術與常規理化分析技術聯用，如利用免疫分析的高選擇性作為理化測定技術中的凈化手段，典型的方式為免疫親合色譜（immunoaffinity chromatogrphy,IAC）。與常規的理化分析技術相比，免疫分析技術最突出的優點是操作簡單，速度快、分析成本低。以使用微量滴板的ELISA為例，免疫測定法取樣量小，前處理簡單、容量大，儀器化程度低，檢測奶與GC/MS或GC/ECD相似，可方便地達到ng/g～pg/g級，分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。目前大部分抗生素已經建立了免疫測定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、鏈霉素、四環素、莫能菌素等。
免疫分析能與其他技術聯用。在聯用方法中，免疫分析技術既可作為HPLC或GC等測定技術的樣品凈化或分離手段，如IAC/HPLIAC/GC、HOIAC/HPLC；也可作為其離線或在線檢測方法，如HPLC/IA、TLC/IA、CZE/IA、SFC/IA、FIA/IA等，這些方法結合了免疫分析的選擇性、靈敏度與HPLC、GC等技術的高速、高效分離和準確檢測能力，使分析過程簡化、分析成本下降，拓展了待測物范圍。在HPLC/IA等分析中，IA一般作為離線檢測方法。又稱免疫圖譜法（immunograms），適用于液相檢測器無響應或分離困難的殘留組分的檢測。FIA/IA可以實現IA的動態、實時和自動檢測，分析速度快，已發展為一種專門的免疫測定技術－FIIA。
ELISA試劑盒是目前奶牛場和牛奶公司使用最廣泛、快速、靈敏的檢測抗生素殘留的方法。國外生產各類抗生素試劑盒成本較高，如德國拜發公司生產的抗生素檢測試劑盒，一個96次檢測試劑盒要花3800元，每個樣品的檢測要花50元左右。天邁生產的各類抗生素試劑盒相對來說成本較低，大約比進口產品成本降低30-50%。